1、 复苏菌种前应准各适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备，所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。
2、 启开菌种宜采用锯开法(锯开前用70%酒精棉消毒菌种管外壁)。用吸管将液体培养基0.3ml左右注入被启开的菌种安瓶中并吹打，使安瓶中的冻干菌种溶解成菌悬液。
3、 将上述菌悬液全部吸出，分别接种到固体斜面和液体培养管中，一般放置在37℃培养箱培养18~24小时。对需要特殊培养条件的细菌，如需5%~10%CO2或厌氧条件等，应分别于CO2培养箱或厌氧培养箱中培养。
4、 次日观察菌种的生长情况，如菌种未生长，应继续培养至72小时。
5、 复苏后的菌种在传1~2代后使用。
6、 暂不启开的安瓶及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。

医用细菌菌种复苏方法图示：