全国细菌耐药监测网技术方案

（2018版）

全国细菌耐药监测网（China Antimicrobial Resistance Surveillance System，CARSS）是唯一由政府建立，覆盖全国二、三级医疗机构的大型细菌耐药性监测网络。通过本监测网络，可获取有科学价值的、分层的细菌耐药性及变迁资料，掌握全国细菌耐药性流行趋势及新威胁，为政府、卫生行政部门制定相关政策及评估干预措施的有效性提供科学依据。

全国细菌耐药监测网包括主动监测和被动监测两种形式，常规开展被动监测，定期或不定期开展主动监测。主动监测技术方案根据监测目标另行制定。

本方案仅涉及被动监测。为了维持监测结果的有效性及可比性，保证监测结果质量，特制订本方案。

本方案由国家卫生计生委合理用药专家委员会全国细菌耐药监测学术委员会讨论通过，每年审核，定期修订。

一、监测范围

收集网点医院按规范化操作、自临床标本中分离的有临床意义和公共卫生意义的所有普通细菌及其抗菌药物敏感性试验（以下简称药敏试验）结果。以收集资料为主，必要时，收集菌株用于复核结果和质量控制。

为了提高监测数据质量，各网点医院应提高临床标本，特别是无菌体液标本送检率；提高送检标本特别是痰液、血液标本合格率。各实验室应提高细菌，特别是苛养菌的检出率；应掌握分离细菌的临床意义，注意收集感染病原菌。

二、目标细菌

目标细菌为自临床标本中分离的有临床意义的细菌，包括以下标本及细菌：

（一）无菌部位标本（血液、脑脊液、骨髓、胸水、膀胱穿刺尿、腹水、无菌腔隙穿刺液、组织等）来源的所有非污染细菌；

（二）开放部位合格标本（痰、咽拭、尿液、粪便等）来源的具有临床意义的细菌。

三、目标细菌鉴定

采用专业认可的鉴定系统或手工方法进行目标细菌鉴定。所有分离细菌尽可能鉴定到种，如表皮葡萄球菌，而非凝固酶阴性葡萄球菌。

四、抗菌药物敏感性试验

根据国际标准、行业要求或仪器制造商建议，规范地进行药敏试验，可采用手工法、仪器法，报告抑菌圈直径（mm）、最小抑菌浓度（MIC值，µg/ml）。

全国细菌耐药监测网不接受仅为“耐药（R）”、“中介（I）”、剂量依赖敏感（SDD）、“敏感（S）”的报告结果。

采用自动或半自动仪器进行药敏试验时，应按照仪器制造商的要求补充试验，报告经补充试验确认的药敏结果。

商品化药敏试验药物浓度范围若不覆盖判断折点，需根据本院临床需要及本方案要求进行补充试验，报告经补充试验确认的药敏结果。

五、特殊耐药性检测方法（不包含分子生物学检测方法）

（一）甲氧西林（苯唑西林）耐药葡萄球菌（MRS）

1、金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌甲氧西林（苯唑西林）耐药性 待测菌按照纸片扩散法操作步骤，采用30µg头孢西丁纸片于33～35℃孵育16～18h，或按照微量肉汤稀释法，采用4µg/ml头孢西丁于33～35℃孵育16～20h，≤21mm或＞4µg/ml为甲氧西林（苯唑西林）耐药金黄色葡萄球菌或路邓葡萄球菌。

2、路邓葡萄球菌、伪中间葡萄球菌、施氏葡萄球菌以外的凝固酶阴性葡萄球菌甲氧西林（苯唑西林）耐药性 待测菌按照纸片扩散法操作步骤，采用30µg头孢西丁纸片于33～35℃孵育24h，≤24mm为甲氧西林（苯唑西林）耐药凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）。若18h后即出现耐药可报告为MRCNS。

（二）青霉素不敏感肺炎链球菌

对于苯唑西林纸片抑菌圈直径≤19mm的肺炎链球菌，需使用MIC方法测定其对青霉素的敏感性。

（三）高水平氨基糖苷类药物耐药肠球菌筛选试验

1、纸片扩散法 将0.5麦氏浊度待测菌接种于MH平板，贴120µg庆大霉素或300µg链霉素纸片，35±2℃孵育16～18h，抑菌圈直径6mm为耐药、≥10mm为敏感，7～9mm为不确定，需以微量肉汤稀释法或琼脂稀释法确认。

2、微量肉汤稀释法 将0.5麦氏浊度待测菌接种于含500µg/ml庆大霉素脑心浸液肉汤（BHI）于35±2℃孵育24h，或接种于含1000µg/ml链霉素的BHI肉汤于35±2℃孵育24～48h（若24h敏感继续孵育），任何生长为耐药。

3、琼脂稀释法 将10µl0.5麦氏浊度待测菌接种于含500µg/ml庆大霉素BHI平板于35±2℃孵育24h，或接种于含2000µg/ml链霉素BHI平板于35±2℃孵育24～48h（若24h敏感继续孵育），＞1个菌落为耐药。

（四）金黄色葡萄球菌和肠球菌属对万古霉素敏感性

万古霉素MIC≥8µg/ml菌株筛查试验：将0.5麦氏浊度待测金黄色葡萄球菌10µl或肠球菌1～10µl接种于含6µg/ml万古霉素的BHI平板（最好用微量吸液管滴加，也可以用棉拭子在菌悬液中浸润后挤干，涂布直径10～15mm或划线接种），35±2℃孵育24h，＞1个菌落可能为金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性减低或肠球菌属对万古霉素耐药。

（五）β-内酰胺酶检测

1、葡萄球菌属

（1）青霉素MIC≤0.12µg/ml或抑菌圈直径≥29mm的金黄色葡萄球菌 待测菌按照纸片扩散法操作步骤，10U青霉素纸片35±2℃孵育16～18h，如纸片边缘界限清晰（cliff现象）为β内酰胺酶阳性，否则为阴性。

（2）青霉素MIC≤0.12µg/ml或抑菌圈直径≥29mm的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌 以头孢硝噻吩纸片刮取MH或血平板孵育16～18h后青霉素或头孢西丁纸片边缘菌落，室温1小时或遵循产品说明书，出现红色/粉红色为β-内酰胺酶阳性。当金黄色葡萄球菌头孢硝噻吩试验阴性时，需经青霉素纸片边缘试验确证其是否为产β-内酰胺酶菌株。

2、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌

以头孢硝噻吩纸片刮取35±2℃孵育的HTM平板（流感嗜血杆菌）或35℃孵育20～24h后MH平板（卡他莫拉菌）上的菌落，红色/粉红色为β-内酰胺酶阳性。

（六）克林霉素诱导性耐药试验

1、葡萄球菌属 按照纸片扩散法操作步骤，将0.5麦氏浊度待测菌接种于MH平板，15µg红霉素纸片和2µg克林霉素纸片边缘相距15～26mm，35±2℃孵育16～18h，与红霉素相邻侧抑菌圈出现“截平”（D形抑菌圈）或克林霉素抑菌圈内有薄雾状生长时为阳性，应报告克林霉素耐药；或将0.5麦氏浊度待测菌接种于含4µg/ml红霉素和0.5µg/ml克林霉素的阳离子调节MH肉汤（CAMHB），35±2℃孵育18～24h，任何生长为阳性，应报告克林霉素耐药。

2、肺炎链球菌和β溶血链球菌 按照纸片扩散法操作步骤，将0.5麦氏浊度待测菌接种于含5%羊血的MH平板或胰酶大豆琼脂平板（TSA），15µg红霉素纸片和2µg克林霉素纸片边缘相距12mm，35±2℃,5%CO₂孵育20～24h，与红霉素相邻侧抑菌圈出现“截平”（D形抑菌圈）或克林霉素抑菌圈内有薄雾状生长时为阳性，应报告克林霉素耐药；或将0.5麦氏浊度待测菌接种于含1µg/ml红霉素和0.5µg/ml克林霉素的CAMHB（含2.5%～5%溶解马血），35±2℃孵育20～24h，任何生长为阳性，应报告克林霉素耐药。

（七）碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌

以纸片扩散法检测肠杆菌科细菌对碳青霉烯类敏感性时，若抑菌圈直径在中介或耐药范围，需使用MIC法进行确认，亚胺培南/美罗培南折点为≤1µg/ml敏感，≥4µg/ml耐药；厄他培南折点为≤0.5µg/ml敏感，≥2µg/ml耐药。

六、目标药物

我国幅员广阔，各医疗机构用药习惯不同，同一种细菌药敏试验所选择的药物不尽相同。为使耐药监测结果能有效应用于抗菌药物临床使用及管理，下表斜体加粗的抗菌药物为各种属细菌必须监测的药物，其它为建议监测药物。

除必须监测的药物外，其它监测药物由各医疗机构微生物学、药学、感染病学专家讨论，遵循以下原则确定：

（一）参照国际、行业要求，并根据标准每年度更新（应至少遵循上一年度的标准）；

（二）根据各种属细菌特点，选择相应药物进行药敏试验。尽量包括本医院临床有效的常用抗菌药物，适当选择临床少用但使用价值高的药物；

（三）根据耐药监测结果调整监测药物种类。

表：全国细菌耐药监测网监测药物

细菌名称	监测药物（斜体加粗者为必须监测药物）
葡萄球菌属	青霉素、头孢西丁(或苯唑西林￥*)、庆大霉素、阿米卡星、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星（或环丙沙星）、万古霉素*、替考拉宁、利奈唑胺、SMZco、利福平、替加环素￥￥、呋喃妥因(尿标本)
肺炎链球菌	分离自脑脊液的肺炎链球菌： 青霉素*、万古霉素、阿莫西林/克拉维酸、头孢呋辛*、头孢曲松* 地址：北京市大兴区生物医药产业基地华佗路31号院 邮编：102629 电话：53852671 传真：53852673 中国食品药品检定研究院（呼吸道细菌疫苗室） 京ICP备17052540号-3 京公网安备 11011502006479号